一、規范適用范圍
 

　　適用于實時熒光定量 PCR 儀多通道檢測場景，規范激發濾光片、發射濾光片組合選型、通道排布、通道間串色規避，統一多通道PCR 濾光片搭配標準，適配染料 FAM、VIC、ROX、CY5、CY3 等常規熒光基團。
 

　　二、基礎搭配核心原則
 

　　激發、發射波段必須錯開，相鄰通道光譜區間無大面積重疊，減少熒光串擾。
 

　　每一組熒光通道獨立配對一組激發濾光片 + 發射濾光片，不可共用濾片。
 

　　參比染料(ROX)通道單獨配置濾光片，不與目標檢測通道混用。
 

　　多通道排布遵循由短波至長波順序安裝，降低光路互相干擾。
 

　　同一臺設備多通道濾光片基底厚度、外徑規格統一，避免光路偏移。
 

　　三、常用熒光通道標準濾光片搭配
 

　　FAM 通道(檢測通道) 激發濾光片：480nm；發射濾光片：520nm
 

　　VIC/HEX 通道(檢測通道) 激發濾光片：530nm；發射濾光片：550nm
 

　　CY3 通道(檢測通道) 激發濾光片：550nm；發射濾光片：570nm
 

　　ROX 參比通道(校正通道) 激發濾光片：580nm；發射濾光片：610nm
 

　　CY5 通道(檢測通道) 激發濾光片：640nm；發射濾光片：670nm
 

　　四、多通道安裝排布規范
 

　　濾片輪卡槽按波長從小到大依次安放：FAM→VIC→CY3→ROX→CY5。
 

　　每組濾光片激發片、發射片成對對應同一光路，不得錯位安裝。
 

　　濾光片鍍膜面朝向光源一側，裝反會大幅降低透光率、信號值下降。
 

　　多通道全部安裝完成后鎖定濾片卡槽，防止運行過程中移位。
 

　　五、通道串色控制搭配要求
 

　　相鄰通道波段間隔≥20nm，間隔過小易發生信號滲漏。
 

　　多通道同步檢測時，優先選用窄帶 PCR 濾光片，帶寬控制在 10–15nm。
 

　　短波通道與長波通道中間設置參比通道做光譜隔離。
 

　　禁止將 FAM 與 CY3、VIC 波段相近通道緊鄰排布。
 

　　六、多通道使用與校準規范
 

　　更換整套多通道濾光片后，必須執行光路校準、熒光基線校正。
 

　　多通道檢測實驗，每個熒光通道單獨做陰性、陽性對照，排查濾片搭配串色問題。
 

　　不同批次濾光片不可混合搭配使用，透光率差異會造成通道數據偏差。
 

　　定期拆分多通道濾光片清潔，清潔后按原配對、原位置復原安裝。
 

　　七、存儲與更換配套規范
 

　　備用多通道濾光片按通道分組存放，標注對應熒光染料，避免混用。
 

　　單通道濾光片損耗更換時，同組激發、發射濾片同步更換，不單獨替換一片。
 

　　多通道濾片輪長期停機，拆卸避光存放，防止鍍膜老化影響多通道檢測穩定性。
 

　　八、搭配不合格常見問題判定
 

　　通道間 Ct 值異常漂移：濾光片波段重疊、排布順序錯誤。
 

　　熒光信號偏低：濾光片正反面裝反、不同規格濾片混用。
 

　　陰性樣品出現熒光數值：相鄰通道濾片帶寬過大，產生串色干擾。